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技術原理

   CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic圖片關鍵詞 Repeats)是最新出現(xiàn)的一種由sgRNA指導Cas核酸酶對靶向基因進行特定DNA修飾的技術。在這一系統(tǒng)中,sgRNA引導序列靶定位點剪切雙鏈DNA達到對基因組DNA 進行修飾的目的。CRISPR/Cas9系統(tǒng)能夠對小鼠基因組特定基因位點進行精確編輯,目前瑞思元已經(jīng)成功將此技術應用于小鼠基因敲除/敲入模型制備,以及條件性敲除(Loxp系統(tǒng))模型制備。      

      目前瑞思元采取優(yōu)化過的野生型Cas9和雙切口Cas9n(Optimized Cas9 System,OCAS and OCASn)。采用優(yōu)化過的雙切口Cas9n(OCASn)可以將脫靶效應降到最低。


H11位點定點過表達

       H11位點(也叫Hipp11)位于小鼠第11號染色體,是 Eif4enif1與Drg1 這兩個基因之間的一個位點,由于H11位點位于兩個基因之間,外源基因插入后對內(nèi)源基因表達的影響很小,同時H11位點所在的Eif4enif1與Drg1這兩個基因的側翼序列區(qū)域具有廣泛的空間和時間EST表達模式,能夠使整合在此的外源基因受指定啟動子的驅動而穩(wěn)定表達。該位點的純合敲入小鼠可正常發(fā)育和繁殖。

       利用CRISPR/cas9系統(tǒng)可以在H11位點構建條件性基因過表達小鼠模型,即廣泛型強啟動子pCAG與外源目的基因cDNA之間用loxP-stop-loxP結構隔開,只有與組織特異性Cre工具鼠交配后,才會在特異細胞或組織中表達目的基因。

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運用

    用于人類基因功能、蛋白功能的過表達研究

技術優(yōu)勢

    研發(fā)周期:4-6個月;

按設計精準插入;

基本保證過表達;

遺傳穩(wěn)定性高;

無需篩選,直接用于分析

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